isolation and hplc quantitation of kaurane-type diterpenes and cinnamic acid derivatives of long-term stored leaves of mikania laevigata and mikania glomerata

The leaves of Mikania laevigata and Mikania glomerata are used in Brazil to treat respiratory affections, being kaurane-type diterpenes and coumarin considered as the bioactive compounds. The present study reports an investigation on the HPLC-DAD profiles and contents of coumarin (1), trans-o-coumaric (2), kaurenoic (3), benzoylgrandifloric (4) and cinnamoylgrandifloric (5) acids in dried leaves of Mikania species stored in dark room under controlled conditions. Excepting 2, the constituents were isolated and purified to be employed as reference compounds. The samples were analyzed at three monthly intervals up to 18 months for M. laevigata and 12 months for M. glomerata. trans-o-Coumaric was not detected in both, whereas 1 occurred only in M. laevigata. The concentrations of the assayed constituents did not vary significantly within the evaluated period (p < 0.05), for both species. In contrast, changes in the chromatographic profiles and spectral purity of peaks from 3, 4 and 5 were detected in samples of both Mikania stored for three months, while the coumarin profile in M. laevigata modified after six months of storage. The evaluation of chromatographic profiles based on spectral purity analyses of selected peaks was shown to be a more robust tool to access chemical stability of Mikania samples than the quantitation of chemical markers' contents.

As folhas de Mikania laevigata e Mikania glomerata são usadas no Brasil para tratar afecções respiratórias, sendo diterpernos caur ânicos e cumarina considerados os constituintes bioativos. O presente estudo relata a investigação dos perfis por CLAE-DAD e os teores de cumarina (1), ácidos trans-o-coumárico (2), caurenóico (3), benzoilgrandiflórico (4) e cinamoilgrandiflórico (5) em folhas secas de espécies de Mikania armazenadas em sala escura, sob condições controladas. Com exceção de 2, os constituintes foram isolados e purificados para serem empregados como subst âncias de referência. As amostras foram analisadas trimestralmente, até um período de 18 meses para M. laevigata e 12 meses para M. glomerata. Ácido trans-o-coumárico não foi detectado em ambas as espécies, enquanto 1 foi encontrado somente em M. laevigata. As concentrações dos constituintes quantificados não variaram significativamente no período avaliado (p < 0,05), para duas espécies. Por outro lado, alterações nos perfis cromatográficos e na pureza espectral dos picos relativos a 3, 4 e 5 foram detectadas em amostras de ambas as espécies de Mikania armazenadas por três meses, enquanto o perfil do pico correspondente a cumarina mostrou-se alterado em M. laevigata a partir do sexto mês de armazenamento. A análise dos perfis cromatográficos baseada na avaliação da pureza espectral dos picos selecionados mostrou-se uma ferramenta mais robusta para acessar a estabilidade química de amostras de Mikania submetidas a armazenamento do que a quantificação do teor dos marcadores químicos.