A Protocol for Double Fluorescent In Situ Hybridization and Immunohistochemistry for the Study of Embryonic Brain Development in Tribolium castaneum.

بروتوكول للتهجين الموضعي الفلوري المزدوج والكيمياء النسيجية المناعية لدراسة تطور الدماغ الجنيني في *Tribolium castaneum*.

Clicks: 369
ID: 103769
2020
Article Quality & Performance Metrics
Overall Quality
Not rated
Combines reader engagement with the AI quality analysis. This article has not been analysed, so there is no overall score — reader engagement is measured and shown alongside.
AI Quality Assessment
Not analyzed
Readership in this journal
Emerging

Ranked #35 of 139 articles by views in methods in molecular biology (clifton, nj)

Most read Least read

Bar heights use a square-root scale. Only the 120 most-read articles are drawn; the journal has 139 in total.

Mint this article as an NFT
Not yet minted

Create a permanent, verifiable on-chain record of this article on the Scimatic Network. The NFT is held in your Journament account, and you can withdraw it to your own wallet at any time.

5 SUSD one-off · no wallet required
Sign in to mint
Abstract
The red flour beetle, Tribolium castaneum, is an emerging model system well suited to the study of embryonic brain development and evolution (see Chapters 11 and 13 ). Brain genesis is driven by specific gene products whose expression underlies a tight spatiotemporal control. Therefore, the analysis of gene expression in time and space provides valuable insights into the molecular mechanisms that govern brain development. Since Tribolium-specific antibodies are scarce, fluorescent RNA in situ hybridization is the method of choice to determine the dynamics of individual gene expression. We have modified common RNA in situ protocols to facilitate the concomitant detection of two gene-specific expression patterns (double fluorescent RNA in situ). In addition, we describe a procedure which combines fluorescent single RNA in situ and immunostaining with gene-specific antibodies. Conventional in situ using RNA probes that are complementary to mature mRNAs often produce diffuse signals. We demonstrate that RNA in situ probes complementary to intronic gene sequences facilitate single cell resolution because the fluorescent signal is restricted to the nucleus. We believe our protocols can be adapted easily to suit the analysis of brain development in other insect species.
تُعدّ خنفساء الدقيق الصدئية (*Tribolium castaneum*) نظامًا نموذجيًا ناشئًا ملائمًا للغاية لدراسة نمو الدماغ الجنيني وتطوره (انظر الفصلين 11 و13). ويُوجَّه تَخَلُّق الدماغ بواسطة نواتج جينية محددة يخضع تعبيرها لضبط زماني ومكاني محكم؛ وبناءً على ذلك، يوفر تحليل التعبير الجيني عبر الزمان والمكان رؤى قيّمة حول الآليات الجزيئية التي تحكم نمو الدماغ. ونظرًا لندرة الأجسام المضادة الخاصة بنوع *Tribolium*، فإن التهجين الموضعي التألقي للحمض النووي الريبوزي (Fluorescent RNA in situ hybridization) هو الطريقة المفضلة لتحديد ديناميكيات التعبير الجيني الفردي. وقد قمنا بتعديل بروتوكولات التهجين الموضعي للرنا الشائعة لتسهيل الكشف المتزامن عن نمطي تعبير جيني محددين (التهجين الموضعي التألقي المزدوج للرنا). بالإضافة إلى ذلك، فإننا نصف إجراءً يجمع بين التهجين الموضعي التألقي الفردي للرنا والتلوين المناعي باستخدام أجسام مضادة خاصة بالجين. غالبًا ما ينتج عن التهجين الموضعي التقليدي—باستخدام مجسات رنا مكملة للرنا المرسال (mRNA) الناضج—إشارات منتشرة وغير محددة بدقة. ونُثبت هنا أن مجسات التهجين الموضعي للرنا المكملة للتسلسلات الإنترونية الجينية تتيح دقةً على مستوى الخلية الواحدة، وذلك لاقتصار الإشارة التألقية على النواة. ونعتقد أن بروتوكولاتنا يمكن تكييفها بسهولة لتلائم تحليل نمو الدماغ في أنواع أخرى من الحشرات.
Reference Key
buescher2020amethods Use this key to autocite in the manuscript while using SciMatic Manuscript Manager or Thesis Manager
Authors Buescher, Marita;Oberhofer, Georg;Garcia-Perez, Natalia Carolina;Bucher, Gregor;
Journal methods in molecular biology (clifton, nj)
Year 2020
DOI
10.1007/978-1-4939-9732-9_12
URL
Keywords
tribolium castaneum brain development fluorescent rna in situ hybridization (fish) gene expression pattern intron-specific probes tyramide signal amplification (tsa)

Citations

No citations found. To add a citation, contact the admin at info@scimatic.org

Comments

No comments yet. Be the first to comment on this article.