Quantification of peripheral whole blood, cell-free plasma and exosome encapsulated mitochondrial DNA copy numbers in patients with atrial fibrillation.

Quantification du nombre de copies d'ADN mitochondrial dans le sang total périphérique, le plasma acellulaire et encapsulé dans les exosomes chez les patients atteints de fibrillation atriale.

Kuantifikasi jumlah salinan DNA mitokondria darah utuh perifer, plasma bebas sel, dan terenkapsulasi eksosom pada pasien dengan fibrilasi atrium.

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2019
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Abstract
Mitochondrial DNA (mtDNA) copy number changes have been associated with various diseases. Several studies showed that mtDNA content in peripheral blood was associated with oxidative stress and cardiovascular disease. Atrial fibrillation (AF) is one of the severe cardiovascular diseases. We aimed to determine the mtDNA copy numbers in peripheral blood, in cell-free plasma and in exosomes of AF patients and healthy controls. Peripheral blood was drawn from 60 AF patients and 72 healthy controls. DNA was isolated from EDTA blood and plasma. Exosomes were isolated from cell-free plasma and then exosome encapsulated DNA (exoDNA) was extracted. Quantitative-real-time PCR was performed with Human Mitochondrial DNA (mtDNA) Monitoring Primer Set. Statistical analysis of the data was performed. We found statistically significant difference in mtDNA copy numbers in DNA isolated from peripheral whole blood, cell-free plasma and exosome samples of controls' (44.4 ± 18.0, 27.2 ± 30.1, 11.5 ± 8.7), and patients' group (43.4 ± 13.6, 26.2 ± 26.4, 14.5 ± 12.3). However there was no significant difference in mtDNA copy number between the two study groups either in peripheral blood, in cell-free plasma and in exosomes, and even in different sexes and ages. We found the highest copy number of mtDNA in peripheral blood, followed by plasma and exosomes. We did not find differences between patients and controls, neither age nor gender had effect on the mtDNA copy number. According to our results the mtDNA copy numbers did not differ in AF patients.
Les variations du nombre de copies de l'ADN mitochondrial (ADNmt) ont été associées à diverses pathologies. Plusieurs études ont montré que la teneur en ADNmt dans le sang périphérique était liée au stress oxydatif et aux maladies cardiovasculaires. La fibrillation atriale (FA) est une affection cardiovasculaire sévère. Notre objectif était de déterminer le nombre de copies d'ADNmt dans le sang périphérique, le plasma acellulaire et les exosomes de patients atteints de FA et de témoins sains. Du sang périphérique a été prélevé chez 60 patients atteints de FA et 72 témoins sains. L'ADN a été isolé à partir de sang sur EDTA et de plasma. Les exosomes ont été isolés à partir du plasma acellulaire, puis l'ADN encapsulé dans les exosomes (exoADN) a été extrait. Une PCR quantitative en temps réel a été réalisée à l'aide du kit d'amorces Human Mitochondrial DNA (mtDNA) Monitoring Primer Set. Une analyse statistique des données a été effectuée. Nous avons mis en évidence une différence statistiquement significative du nombre de copies d'ADNmt dans l'ADN isolé à partir du sang total périphérique, du plasma acellulaire et des exosomes au sein du groupe témoin (44,4 ± 18,0 ; 27,2 ± 30,1 ; 11,5 ± 8,7) et du groupe de patients (43,4 ± 13,6 ; 26,2 ± 26,4 ; 14,5 ± 12,3). Cependant, aucune différence significative du nombre de copies d'ADNmt n'a été observée entre les deux groupes d'étude, que ce soit dans le sang périphérique, le plasma acellulaire ou les exosomes, ni en fonction du sexe ou de l'âge. Le nombre de copies d'ADNmt le plus élevé a été retrouvé dans le sang périphérique, suivi par le plasma et les exosomes. Nous n'avons constaté aucune différence entre les patients et les témoins, et ni l'âge ni le sexe n'ont eu d'effet sur le nombre de copies d'ADNmt. D'après nos résultats, le nombre de copies d'ADNmt ne différait pas chez les patients atteints de FA.
Perubahan jumlah salinan DNA mitokondria (mtDNA) telah dikaitkan dengan berbagai penyakit. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa kandungan mtDNA dalam darah perifer berhubungan dengan stres oksidatif dan penyakit kardiovaskular. Fibrilasi atrium (AF) merupakan salah satu penyakit kardiovaskular yang berat. Kami bertujuan untuk menentukan jumlah salinan mtDNA dalam darah perifer, plasma bebas sel, dan eksosom pada pasien AF serta kontrol sehat. Darah perifer diambil dari 60 pasien AF dan 72 kontrol sehat. DNA diisolasi dari darah EDTA dan plasma. Eksosom diisolasi dari plasma bebas sel, kemudian DNA terenkapsulasi eksosom (exoDNA) diekstraksi. *Quantitative real-time PCR* dilakukan menggunakan *Human Mitochondrial DNA (mtDNA) Monitoring Primer Set*. Analisis statistik terhadap data telah dilakukan. Kami menemukan perbedaan yang signifikan secara statistik pada jumlah salinan mtDNA dalam DNA yang diisolasi dari sampel darah lengkap perifer, plasma bebas sel, dan eksosom pada kelompok kontrol (44,4 ± 18,0; 27,2 ± 30,1; 11,5 ± 8,7) maupun kelompok pasien (43,4 ± 13,6; 26,2 ± 26,4; 14,5 ± 12,3). Namun, tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada jumlah salinan mtDNA antara kedua kelompok studi, baik pada darah perifer, plasma bebas sel, maupun eksosom, dan bahkan pada jenis kelamin serta usia yang berbeda. Kami menemukan jumlah salinan mtDNA tertinggi pada darah perifer, diikuti oleh plasma dan eksosom. Kami tidak menemukan perbedaan antara pasien dan kontrol; baik usia maupun jenis kelamin tidak memengaruhi jumlah salinan mtDNA. Berdasarkan hasil penelitian kami, jumlah salinan mtDNA tidak berbeda pada pasien AF.
Reference Key
soltsz2019quantificationjournal Use this key to autocite in the manuscript while using SciMatic Manuscript Manager or Thesis Manager
Authors Soltész, Beáta;Urbancsek, Réka;Pös, Ondrej;Hajas, Orsolya;Forgács, Ildikó Noémi;Szilágyi, Edina;Nagy-Baló, Edina;Szemes, Tomas;Csanádi, Zoltán;Nagy, Bálint;
Journal journal of biotechnology
Year 2019
DOI
S0168-1656(19)30141-5
URL
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