Endothelial Cell-Derived TGF-β Promotes Epithelial-Mesenchymal Transition via CD133 in HBx-Infected Hepatoma Cells.

TGF-β المشتق من الخلايا البطانية يُعزز التحول الظهاري الميزنشيمي عبر CD133 في خلايا ورم الكبد المصابة بـ HBx.

Clicks: 251
ID: 32080
2019
Article Quality & Performance Metrics
Overall Quality
Not rated
Combines reader engagement with the AI quality analysis. This article has not been analysed, so there is no overall score — reader engagement is measured and shown alongside.
AI Quality Assessment
Not analyzed
Readership in this journal
Popular

Ranked #31 of 45 articles by views in Frontiers in oncology

Most read Least read

Bar heights use a square-root scale.

Mint this article as an NFT
Not yet minted

Create a permanent, verifiable on-chain record of this article on the Scimatic Network. The NFT is held in your Journament account, and you can withdraw it to your own wallet at any time.

5 SUSD one-off · no wallet required
Sign in to mint
Abstract
Hepatitis B-X Protein (HBx) encoded in Hepatitis B virus (HBV) is known to play a critical role in development and progression of HBV induced hepatocellular carcinoma (HCC). HBx interacts with and activates various cells in HCC microenvironment to promote tumor initiation, progression and invasion. In this study, we investigated how surrounding stromal cells interact with HBx-infected hepatoma cells by a series of co-culture studies. Huh7 hepatoma cells were cultured and transfected with the mammalian expression vector pGFP-HBx. Co-culture assays were performed between HBx-transfected Huh7 cells and conditioned media (CM) from stromal cells [endothelial cell lines (HUVECs) and hepatic stellate cell lines (LX2 cells)]. The effect of these interactions was studied by a series of functional assays like chemotaxis, invasion, and wound healing scratch assays. Also, quantitative real time (RT)-PCRs of the mesenchymal genes was performed in the hepatoma cells with and without the co-cultures. Hep3B cells with an integrated HBV genome were taken as positive controls. HBx-transfected Huh7 cells cultured in presence of CM from HUVECs illustrated enhanced migration and tube formation as compared to HBx-transfected cells cultured alone or co-cultured with LX2 cells. HBx-transfected hepatoma cells incubated with CM from HUVECs also expressed mesenchymal genes including Thy1, CDH2, TGFβR1, VIM, and CD133. ELISAs revealed increased levels of TGF-β in CM from HUVECs. In comparison to unstimulated HBx-transfected Huh7 cells, TGF-β stimulated cells displayed increased invasive properties and mesenchymal gene expression. RT-PCR and flow cytometry analysis further demonstrated that incubation with either CM from HUVECs or TGF-β significantly increased the expression of a stemness marker, CD133 in HBx-infected hepatoma cells. Gene inhibition experiments with CD133 siRNA showed a downregulation of mesenchymal gene expression and properties in TGF-β induced HBx-infected hepatoma cells as compared to that observed in control siRNA treated cells, indicating CD133 as one of the key molecules affecting epithelial to mesenchymal transition (EMT) in HBx-infected cells. The study indicates that secretory factors like TGF-β from neighboring endothelial cells may enhance expression of CD133 and impart an aggressive EMT phenotype to HBx-infected hepatoma cells in HBV induced HCC.
من المعروف أن بروتين X لفيروس التهاب الكبد ب (HBx)، المُشَفَّر في فيروس التهاب الكبد ب (HBV)، يلعب دوراً حاسماً في نشوء وتطور سرطانة الخلايا الكبدية (HCC) المحدثة بفيروس HBV. يتفاعل بروتين HBx مع خلايا متنوعة في البيئة المجهرية لسرطانة الخلايا الكبدية وينشطها لتعزيز نشوء الورم وتطوره وغزوه. وقد استقصينا في هذه الدراسة كيفية تفاعل الخلايا اللحمية المحيطة مع خلايا الورم الكبدي المصابة بـ HBx عبر سلسلة من دراسات الاستنبات المشترك. أُجري استنبات لخلايا الورم الكبدي Huh7 وتعداؤها بناقل التعبير في الثدييات pGFP-HBx. كما أُجريت مقايسات الاستنبات المشترك بين خلايا Huh7 المُعدّاة بـ HBx والوسط المكيَّف (CM) المأخوذ من الخلايا اللحمية [خطوط الخلايا البطانية (HUVECs) وخطوط الخلايا النجمية الكبدية (خلايا LX2)]. ودُرِس تأثير هذه التفاعلات عبر سلسلة من المقايسات الوظيفية مثل الانجذاب الكيميائي، والغزو، ومقايسات التئام الجروح بالخدش. وعلاوة على ذلك، أُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR) للجينات اللحمية المتوسطة في خلايا الورم الكبدي مع الاستنبات المشترك وبدونه، واستُخدمت خلايا Hep3B الحاملة لجينوم HBV المندمج كشواهد موجبة. أظهرت خلايا Huh7 المُعدّاة بـ HBx والمستنبتة في وجود الوسط المكيَّف لخلايا HUVECs زيادةً في الهجرة وتكوين الأنابيب مقارنةً بالخلايا المُعدّاة بـ HBx المستنبتة بمفردها أو المستنبتة اشتراكياً مع خلايا LX2. كما عبّرت خلايا الورم الكبدي المُعدّاة بـ HBx والمحضونة مع الوسط المكيَّف لخلايا HUVECs عن جينات لحمية متوسطة شملت Thy1 وCDH2 وTGFβR1 وVIM وCD133. وأظهرت مقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ارتفاع مستويات عامل النمو المحول بيتا (TGF-β) في الوسط المكيَّف لخلايا HUVECs. ومقارنةً بخلايا Huh7 المُعدّاة بـ HBx غير المحفَّزة، أظهرت الخلايا المحفَّزة بـ TGF-β خصائص غزو متزايدة وتفوقاً في التعبير عن الجينات اللحمية المتوسطة. أثبت تحليل RT-PCR والقياس الخلوي بالجريان (flow cytometry) أيضاً أن الحضانة مع الوسط المكيَّف لخلايا HUVECs أو مع TGF-β زادت بشكل ملحوظ من التعبير عن مؤشر الجذعية CD133 في خلايا الورم الكبدي المصابة بـ HBx. وأظهرت تجارب تثبيط الجينات باستخدام الحمض النووي الريبوزي الصغير المتداخل (siRNA) الموجه ضد CD133 تراجعاً في التعبير عن الجينات اللحمية المتوسطة وخصائصها في خلايا الورم الكبدي المصابة بـ HBx والمستحثة بـ TGF-β مقارنةً بما لوحظ في الخلايا المعالجة بـ siRNA الضابط، مما يشير إلى أن CD133 يُعد أحد الجزيئات الرئيسية المؤثرة في التحول الظهاري إلى اللحمي المتوسط (EMT) في الخلايا المصابة بـ HBx. تشير هذه الدراسة إلى أن العوامل الإفرازية، مثل TGF-β الصادر عن الخلايا البطانية المجاورة، قد تعزز التعبير عن CD133 وتُضفي نمطاً ظاهرياً عدوانياً للتحول الظهاري إلى اللحمي المتوسط على خلايا الورم الكبدي المصابة بـ HBx في سرطانة الخلايا الكبدية المحدثة بفيروس HBV.
Reference Key
rawal2019endothelialfrontiers Use this key to autocite in the manuscript while using SciMatic Manuscript Manager or Thesis Manager
Authors Preety Rawal, Hamda Siddiqui, Mohsin Hassan, Manish Chandra Choudhary, Dinesh M Tripathi, Vikrant Nain, Nirupama Trehanpati, Savneet Kaur
Are you one of these authors? Claim your profile
Journal Frontiers in oncology
Year 2019
DOI
10.3389/fonc.2019.00308
URL
Keywords Keywords not found

Citations

No citations found. To add a citation, contact the admin at info@scimatic.org

Comments

No comments yet. Be the first to comment on this article.