Production and Partial Purification of the Coat Protein 42 Polyclonal Antibody Against Inclusion Body Expressed in .

إنتاج وتنقية جزئية للأجسام المضادة متعددة النسائل لبروتين الغلاف 42 ضد الجسم الاشتمالي المُعَبَّر عنه في .

Clicks: 391
ID: 21780
2018
Article Quality & Performance Metrics
Overall Quality
Not rated
Combines reader engagement with the AI quality analysis. This article has not been analysed, so there is no overall score — reader engagement is measured and shown alongside.
AI Quality Assessment
Not analyzed
Readership in this journal
Star

Ranked #6 of 12 articles by views in iranian journal of biotechnology

Most read Least read

Bar heights use a square-root scale.

Mint this article as an NFT
Not yet minted

Create a permanent, verifiable on-chain record of this article on the Scimatic Network. The NFT is held in your Journament account, and you can withdraw it to your own wallet at any time.

5 SUSD one-off · no wallet required
Sign in to mint
Abstract
Expression of virus coat protein (CP) in often leads to production of partially folded aggregated proteins which are called inclusion bodies. virus (GFLV) is one of the most serious and widespread grapevine virus diseases around the world and in Iran.The main objective of this study was to find a simple and brief method for producing polyclonal antibodies (PAbs) to be used for immunodiagnosis of GFLV.An antigenic determinant in GFLV CP gene was inserted into pET-28a bacterial expression vector and the construct (pET-28a CP42) was cloned into E. coli strain BL21 (DE3).The recombinant coat protein of GFLV (CP42) was expressed and characterized by SDS-PAGE and western blot analysis using commercial anti-GFLV antibody. Expression of the CP was detected in the form of inclusion bodies in insoluble cytoplasmic fraction. Then, the inclusion bodies were isolated from the bacterial cells and injected into rabbits for PAbs production. The reaction of the antiserum was checked by ELISA assay. In order to analyze efficiency of the produced PAbs, first the infected and uninfected grapevine samples were confirmed based on morphological symptoms then the indirect plate- trapped antigen Enzyme-linked Immunosorbent Assay (IPTA-ELISA) was applied using the commercial anti GFLV antibody. In the next ELISA assay, efficiency of the raised polyclonal antibody was compared with commercial one.The expression of recombinant CP42 induced by IPTG was confirmed by the band of 42 kDa in SDS-PAGE and western blot. The antiserum of purified inclusion body immunized rabbit was reacted with CP42 and GFLV infected Grapevine samples. The results revealed an acceptable efficacy for prepared antibodies compared to that of commercial antibody.It was evident that the recombinant coat protein in the form of inclusion bodies can be prepared and used as the antigen for immunizing animals in order to produce PAbs.
غالبًا ما يؤدي التعبير عن بروتين الغلاف الفيروسي (CP) إلى إنتاج بروتينات متجمعة ومطوية جزئيًا تُعرف بالأجسام الاشتمالية (inclusion bodies). ويُعد فيروس تروّح أوراق العنب (GFLV) أحد أخطر الأمراض الفيروسية التي تصيب الكرمة وأوسعها انتشارًا حول العالم وفي إيران. كان الهدف الرئيس من هذه الدراسة إيجاد طريقة بسيطة وموجزة لإنتاج أجسام مضادة متعددة النسائل (PAbs) لاستخدامها في التشخيص المناعي لفيروس GFLV. تم إدراج محدد مستضدي في جين البروتين الغلافي لفيروس GFLV داخل ناقل التعبير البكتيري pET-28a، واستُنسخ البناء الجيني (pET-28a CP42) في سلالة الإشريكية القولونية *E. coli* BL21 (DE3). جرى التعبير عن بروتين الغلاف المؤتلف لفيروس GFLV (المسمى CP42) وتوصيفه عن طريق الرحلان الكهربائي في هلام متعدد الأكريلاميد بوجود كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS-PAGE) وتحليل لطخة ويسترن باستخدام جسم مضاد تجاري مضاد لفيروس GFLV. كُشف عن التعبير عن بروتين الغلاف في صورة أجسام اشتمالية ضمن الجزء السيتوبلازمي غير الذائب. بعد ذلك، عُزلت الأجسام الاشتمالية من الخلايا البكتيرية وحُقنت في الأرانب لإنتاج الأجسام المضادة متعددة النسائل (PAbs). تم التحقق من تفاعل المصل المناعي عبر مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). ومن أجل تحليل كفاءة الأجسام المضادة متعددة النسائل المُنتجة، تم أولاً تأكيد عينات الكرمة المصابة وغير المصابة بناءً على الأعراض المورفولوجية، ثم طُبقت مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم غير المباشرة باحتجاز المستضد على الصفيحة (IPTA-ELISA) باستخدام الجسم المضاد التجاري المضاد لفيروس GFLV. وفي مقايسة ELISA اللاحقة، قُورنت كفاءة الجسم المضاد متعدد النسائل المُستحث بنظيره التجاري. أُكِّد التعبير عن البروتين المؤتلف CP42 المُحفَّز بواسطة IPTG من خلال ظهور حزمة بحجم 42 كيلو دالتون في تحليلي SDS-PAGE ولطخة ويسترن. وتفاعل المصل المناعي للأرانب المحصنة بالأجسام الاشتمالية المنقاة مع البروتين CP42 وعينات الكرمة المصابة بفيروس GFLV. أظهرت النتائج كفاءة مقبولة للأجسام المضادة المُحضَّرة مقارنةً بالجسم المضاد التجاري. وقد اتضح أنه يمكن تحضير البروتين الغلافي المؤتلف في هيئة أجسام اشتمالية واستخدامه كمستضد لتحصين الحيوانات بغرض إنتاج الأجسام المضادة متعددة النسائل (PAbs).
Reference Key
shibaei2018productioniranian Use this key to autocite in the manuscript while using SciMatic Manuscript Manager or Thesis Manager
Authors Shibaei, Naeimeh;Majidi, Jafar;Bashir, Nemat Sokhandan;Karkhaneh, Aliasghar;Razavi, Khadijeh;
Journal iranian journal of biotechnology
Year 2018
DOI
10.21859/ijb.1525
URL
Keywords Keywords not found

Citations

No citations found. To add a citation, contact the admin at info@scimatic.org

Comments

No comments yet. Be the first to comment on this article.