avaliação de testes rápidos em microplacas usando indicadores de viabilidade celular para determinação da susceptibilidade de cepas de mycobacterium tuberculosis à isoniazida e rifampicina evaluation of rapid microplate assays using cellular-viability indicators to determine patterns of susceptibility to isoniazid and rifampin in mycobacterium tuberculosis strains

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2004
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Abstract
INTRODUÇÃO: As taxas de resistência aos fármacos constituem um dos pilares da avaliação dos programas de controle da tuberculose. A demora na obtenção dos resultados, conseqüência da metodologia convencional utilizada, faz com que haja a necessidade de avaliação de novos testes, mais rápidos e menos onerosos. OBJETIVO: Comparar técnicas fenotípicas rápidas para determinação do perfil de susceptibilidade de M. tuberculosis, utilizando indicadores de viabilidade celular, com o teste das proporções em Löwenstein-Jensen, padrão-ouro. MÉTODO: Foram utilizadas 166 cepas de M. tuberculosis com o perfil de susceptibilidade conhecido. A concentração mínima inibitória de cada fármaco foi determinada, em microplaca, utilizando-se meio líquido e os indicadores de oxi-redução, Alamar Blue® e brometo de tetrazolium. O ponto de corte entre a cepa sensível e a resistente foi estabelecido como concentração mínima inibitória maior ou igual a 0,2 mg /mL para isoniazida e 1,0 mg /mL para rifampicina. RESULTADOS: Houve concordância total entre os dois métodos de determinação da concentração mínima inibitória. Comparando os resultados dos testes com o padrão-ouro, obteve-se uma concordância de 95%, para isoniazida e rifampicina. O tempo para obtenção dos resultados foi de 7 dias, contrastando com os 28 dias pelo método convencional. CONCLUSÃO: Os testes para determinação da concentração mínima inibitória, em meio líquido, utilizando indicadores de oxi-redução, são rápidos e podem se utilizados como alternativa rápida na determinação de susceptibilidade de cepas de M. tuberculosis.
BACKGROUND: Knowledge of the rates of drug resistance is one of the pillars of tuberculosis control program evaluation. Data from low-resource countries are scarce and results are delayed due to the techniques employed. There is therefore an urgent need for evaluation of faster and less onerous testing methods. OBJECTIVE: To compare the performance of rapid colorimetric assays for phenotyping that employ oxidation-reduction indicators to determine the susceptibility profile of Mycobacterium tuberculosis with the gold-standard proportion method on Lowenstein-Jensen Medium. METHOD: We analyzed 166 M. tuberculosis strains of known susceptibility. Minimal inhibition concentrations for isoniazid and rifampicin were determined in microplates, using a liquid medium and Alamar Blue and tetrazolium bromide indicators. To measure agreement the Kappa value was used. Cutoff values between sensitive and resistant strains were defined as 0.2mg/mL and 1.0mg/mL for isoniazid and rifampicin, respectively. RESULTS: There was 100% concordance between Alamar Blue and tetrazolium bromide methods in the determination of minimal inhibition concentrations. Agreement between the colorimetric method and the Lowenstein-Jensen was 95% for isoniazid and rifampicin. Using the colorimetric method, results were obtained within 7 days, in contrast to the 28 days required for the conventional method. CONCLUSIONS: Assays to determine minimal inhibition concentrations in liquid medium and employing oxidation-reduction indicators proved to be rapid and inexpensive. This method has the potential to become a faster, alternative method for determining susceptibility of M. tuberculosis strains in developing countries.
Reference Key
ribeiro2004jornalavaliao Use this key to autocite in the manuscript while using SciMatic Manuscript Manager or Thesis Manager
Authors ;Marta Osório Ribeiro;Marlei da Silva Gomes;Simone Gonçalves Senna;Maria Lucia Rosa Rossetti;Leila de Souza Fonseca
Journal cryobiology
Year 2004
DOI
10.1590/S1806-37132004000400011
URL
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1806-37132004000400011
Keywords
disease susceptibility isoniazid tuberculose

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