different extenders on sperm motility and plasmatic membrane integrity after ovine semen freezing and thawing diferentes diluentes sobre a motilidade e integridade de membrana plasmática após o congelamento e descongelamento de sêmen ovino

The influence at the progressive motility and post-thawing plasmatic membrane integrity of different extenders (Tris-Yolk-based, Tris-Yolk/Skim Milk-based and Skim Milk-based) was studied in rams frozen semen, using a split-sample technique. The semen was obtained from four Santa Inês located in the district Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brazil. A total of 8 semen collections per ram made possible 672 observations, i.e. 32 semen collections/ 3 semen extenders / 7 observations steps. The progressive motility was determined in the cool semen (Mpi) and after dilution with fraction A of extender (Mp1), a 2-hour balance period (Mp2), dilution in fraction B (Mp3), a 14-hour balance period (Mp4), semen exposure to N2-liquid vapor (Mp5) and post-thawing (Mp6). The sperm plasmatic membrane integrity was determined by employing fluorochromes carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide at post-thawing (Mp6). Tris-Yolk-extender showed a Tris-Yolk/Skim Milk- and Skim Milk-extenders superior performance on recovering the post-thawing progressive motility. The rams presented the highest post-thawing sperm membrane integrity when the semen was frozen in Skim Milk-extender, in comparison to the Tris-Yolk and Tris-Yolk/Skim Milk-extenders. Concluding, it is necessary to elucidate the protection underlying mechanism conferred by the extenders studied over the investigated sperm parameters, given the finding of different extenders specificities on protecting motility and sperm integrity.
Foi estudada a influência do leite em pó desnatado, usando-se a técnica de subdivisões da amostragem, sobre a motilidade progressiva e integridade de membrana plasmática, após o congelamento/descongelamento de sêmen ovino. O sêmen foi obtido de quatro carneiros da raça Santa Inês, localizados no distrito de Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 8 coletas de sêmen por carneiro possibilitou 672 observações, i.e., 32 coletas de sêmen/ 3 diluidores de sêmen / 7 repetições. As observações da motilidade progressiva foram avaliadas no sêmen fresco (Mpi), após a diluição com a fração A do diluente (Mp1), o período de equilíbrio de 2 horas (Mp2), a diluição com a fração B (Mp3), o período de equilíbrio de 14 horas (Mp4), a exposição do sêmen ao vapor de N2-líquido (Mp5) e o descongelamento (Mp6). A integridade de membrana plasmática foi avaliada por meio dos fluorocromos, diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio no pós-descongelamento (Mp6). Os diluentes utilizados para o congelamento do sêmen foram Tris-Gema, Tris-Gema-Leite e Leite. O diluente Tris-Gema mostrou desempenho superior aos diluentes Tris-Gema-Leite e Leite no que se refere à recuperação da motilidade progressiva após o descongelamento. Os carneiros da raça Santa Inês apresentaram maior integridade de membrana espermática pós-descongelamento quando o sêmen foi congelado no diluente Leite, em relação ao sêmen congelado nos diluentes Tris-Gema e Tris-Gema-Leite. Pode-se concluir que existe a necessidade de se elucidar o mecanismo de proteção, conferido pelos diluentes estudados, sobre os parâmetros espermáticos, dada a constatação de diferentes especificidades dos diluentes na proteção da motilidade e integridade espermática.