avaliação de testes rápidos em microplacas usando indicadores de viabilidade celular para determinação da susceptibilidade de cepas de mycobacterium tuberculosis à isoniazida e rifampicina evaluation of rapid microplate assays using cellular-viability indicators to determine patterns of susceptibility to isoniazid and rifampin in mycobacterium tuberculosis strains

INTRODUÇÃO: As taxas de resistência aos fármacos constituem um dos pilares da avaliação dos programas de controle da tuberculose. A demora na obtenção dos resultados, conseqüência da metodologia convencional utilizada, faz com que haja a necessidade de avaliação de novos testes, mais rápidos e menos onerosos. OBJETIVO: Comparar técnicas fenotípicas rápidas para determinação do perfil de susceptibilidade de M. tuberculosis, utilizando indicadores de viabilidade celular, com o teste das proporções em Löwenstein-Jensen, padrão-ouro. MÉTODO: Foram utilizadas 166 cepas de M. tuberculosis com o perfil de susceptibilidade conhecido. A concentração mínima inibitória de cada fármaco foi determinada, em microplaca, utilizando-se meio líquido e os indicadores de oxi-redução, Alamar Blue® e brometo de tetrazolium. O ponto de corte entre a cepa sensível e a resistente foi estabelecido como concentração mínima inibitória maior ou igual a 0,2 mg /mL para isoniazida e 1,0 mg /mL para rifampicina. RESULTADOS: Houve concordância total entre os dois métodos de determinação da concentração mínima inibitória. Comparando os resultados dos testes com o padrão-ouro, obteve-se uma concordância de 95%, para isoniazida e rifampicina. O tempo para obtenção dos resultados foi de 7 dias, contrastando com os 28 dias pelo método convencional. CONCLUSÃO: Os testes para determinação da concentração mínima inibitória, em meio líquido, utilizando indicadores de oxi-redução, são rápidos e podem se utilizados como alternativa rápida na determinação de susceptibilidade de cepas de M. tuberculosis.
BACKGROUND: Knowledge of the rates of drug resistance is one of the pillars of tuberculosis control program evaluation. Data from low-resource countries are scarce and results are delayed due to the techniques employed. There is therefore an urgent need for evaluation of faster and less onerous testing methods. OBJECTIVE: To compare the performance of rapid colorimetric assays for phenotyping that employ oxidation-reduction indicators to determine the susceptibility profile of Mycobacterium tuberculosis with the gold-standard proportion method on Lowenstein-Jensen Medium. METHOD: We analyzed 166 M. tuberculosis strains of known susceptibility. Minimal inhibition concentrations for isoniazid and rifampicin were determined in microplates, using a liquid medium and Alamar Blue and tetrazolium bromide indicators. To measure agreement the Kappa value was used. Cutoff values between sensitive and resistant strains were defined as 0.2mg/mL and 1.0mg/mL for isoniazid and rifampicin, respectively. RESULTS: There was 100% concordance between Alamar Blue and tetrazolium bromide methods in the determination of minimal inhibition concentrations. Agreement between the colorimetric method and the Lowenstein-Jensen was 95% for isoniazid and rifampicin. Using the colorimetric method, results were obtained within 7 days, in contrast to the 28 days required for the conventional method. CONCLUSIONS: Assays to determine minimal inhibition concentrations in liquid medium and employing oxidation-reduction indicators proved to be rapid and inexpensive. This method has the potential to become a faster, alternative method for determining susceptibility of M. tuberculosis strains in developing countries.