spectrophotometric determination of total proteins in blood plasma: a comparative study among dye-binding methods

Abstract

A comparative study between the biuret method (standard method for total proteins) and spectrophotometric methods using dyes (Bradford, 3',3",5',5"-tetrabromophenolphthalein ethyl ester-TBPEE, and erythrosin-B) was carried out for the determination of total proteins in blood plasma from rats. Bradford method showed the highest sensitivity for proteins and biuret method showed the lowest. For all the methods, the absorbance for different proteins (BSA, casein, and egg albumin) was measured and Bradford method showed the lowest variation of absorbance. The concentration of total protein obtained by using Bradford method was not statistically different (p>0.05) from concentration of total protein obtained by the biuret method. But in regard to erythrosin-B and TBPEE methods the concentrations of total protein were statistically different (p<0.05). Thus, Bradford method could be used instead of the biuret method for determination of total proteins in blood plasma.
A determinação de proteínas totais em plasma sangüíneo é importante em diversas áreas de pesquisa. Um estudo comparativo entre o método de biureto (método padrão para proteínas totais) e diversos métodos que utilizam corantes (Bradford, tetrabromofenolftaleína etil éster-TBPEE, e eritrosina-B) foi realizado para a determinação de proteínas totais em plasma sangüíneo de ratos. O método de Bradford mostrou a maior sensibilidade para proteínas e o de biureto a menor. Para todos os métodos, as absorbâncias para diferentes proteínas (BSA, caseína, e ovoalbumina) foram medidas e o método de Bradford mostrou a menor variação da absorbância. Utilizando o método de Bradford a concentração de proteínas totais obtida não foi estatisticamente diferente (p>0.05) daquela obtida pelo método do biureto. Porém, para os métodos da eritrosina-B e TBPEE as concentrações de proteínas totais foram estatisticamente diferentes (p<0.05) da obtida pelo método de biureto. Portanto o método de Bradford pode ser utilizado no lugar do método de biureto para a determinação de proteínas totais em plasma sangüíneo.